NHS磁珠是含NHS(琥珀酰亞胺)功能基團的超順磁性納米磁珠微球,可與核酸、蛋白、抗體或其它分子上的伯胺進行偶聯反應形成穩定的酰胺鍵。偶聯后的磁珠可通過磁場吸附從溶液中分離出來,直接用于下游的酶反應或大分子的免疫純化分離等試驗。
作用原理(示意圖):
琥珀酰亞胺(HNS)磁珠與國際P品牌琥珀酰亞胺(NHS)磁珠提取效果對比的實例見下。
實驗結果顯示,醫脈賽(EmerTher)琥珀酰亞胺(NHS)磁珠提取量高五倍,而且分散性好,不易結塊。
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
---|---|---|
FE04001 | 20mg/ml,1ml | 略 |
FE04002 | 20mg/ml,5ml | 略 |
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【手工實驗步驟】
以下實驗步驟提供EmerTher NHS磁珠的一般操作流程,實驗中的試劑用量可根據反應物的多少而相應增減。針對不同的用途,建議對偶合的條件(蛋白質濃度,偶聯緩沖
液,pH和孵育時間)進行相應的優化,具體實驗中磁珠的用量也可以適當調整。
1. 取50μl磁珠(1mg)于離心管中;
2. 加入1ml洗滌緩沖液洗滌磁珠,離心管置于磁力架上吸磁,棄上清;
3. 再次用1ml洗滌緩沖液洗滌磁珠,磁場吸附,棄上清;
4. 用5ml偶聯緩沖液重懸磁珠,配成磁珠懸液,可超聲分散;
5. 偶聯蛋白溶液配制:將待偶聯蛋白溶解在5ml偶聯緩沖液中,蛋白濃度一般1-10 mg/ml;
6. 在5ml磁珠懸液中加入前一步驟配制好的5ml偶聯蛋白溶液,將混合液置于旋轉混合儀室溫下混合2-4小時,或4°C過夜;
7. 磁場分離磁珠,移除含蛋白上清液;
8. 加入10ml封閉緩沖液,重懸磁珠,置于旋轉混合儀室溫下混合2-4hr,或4°C過夜;
9. 通過磁場分離磁珠;
10. 用1ml封閉緩沖液洗滌偶聯蛋白的磁珠兩次,每次15min,磁場吸附,棄上清;
11. 用1ml封閉緩沖液或合適的緩沖液懸浮磁珠;
12. 偶聯后的磁珠于2-8°C儲存。
A. 蛋白不溶于結合緩沖液,有什么好辦法嗎?
蛋白可能為疏水性的,溶解蛋白之前可在結合緩沖液中加入適量DMSO(最多20%)。
B. 結合效率低,有什么原因呢?
含有伯胺的緩沖液沒有完全去除。請在蛋白結合之前對蛋白樣品去鹽或透析以完全去除伯胺(如Tris和glycine)。