磁珠法石蠟包埋樣品RNA提取試劑盒
分類：石蠟包埋樣本RNA提取目錄：RE02
產品特性：
| 環境安全 |
| 高通量：自動快速完成石蠟樣本RNA提取 |
| 高效去交聯效果 |
| 穩定：保護易降解RNA |
| 自動化適用 |
| 增強腫瘤和其他疾病診斷和靶向治療準確性 |
本試劑盒適用于石蠟樣本中RNA。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成：經過獨特的表面修飾的磁珠，結合核酸能力更強、洗脫更容易；操作步驟簡單，操作時間短，可在室溫下完成整個提取過程，適合于快速核酸提取的磁珠自動化過程。
操作流程（示意圖）：
磁珠法石蠟包埋樣本RNA提取試劑盒提取石蠟包埋樣本RNA的應用實例見下。
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| RE02001 | 20份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| RE02002 | 100份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| RE0296B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
| RE0260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
| RE0296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手工提取步驟】
A、 脫蠟
1. 溶解蛋白酶K： 按標簽所示， 吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解；
2. 取一定量石蠟包埋組織（如1-5片10μm厚的石蠟切片組織樣本），轉移至1.5ml離心管中；
3. 加入300μl石蠟樣本液，150μl ATL緩沖液和10μl 蛋白酶K ，置于56°C 恒溫水浴鍋孵育1hr，期間混勻3-5次。也可消化過夜；
B、消化
4. 在組織樣本中加入150μl石蠟消化液置于85°C 恒溫水浴鍋孵育20min；
C、 RNA提取
5. 15,000g離心5min；
6. 小心吸取全部下層液體，加入600μl裂解吸附液、30μl核酸提取磁珠，置于旋轉混合儀，溫和混勻15min；
7. 用磁分離架吸附磁珠1min，棄上清；
8. 加入600μl洗滌液I 洗滌磁珠，顛倒混勻洗滌1min，吸附磁珠，棄上清；
9. 再加入600μl洗滌液II洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
10. 加入600μl洗滌液III 洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
11. 再加入600μl洗滌液III洗滌磁珠1min，吸附磁珠；
12. 盡量吸棄上清后靜置3-5min，去除乙醇殘留；
13. 加入100μl洗脫液，混和均勻洗脫5min；
14. 磁場吸附磁珠，回收含RNA的洗脫液至另一RNase-free離心管內；進行RNA檢測及后續實驗，或者保存于-20°C冰箱；長期保存請置于-70°C或加入RNase Inhibitor。
【自動化提取步驟（以32通道為例）】
1. RE0296B預裝板設置（96孔深孔板，樣品量200μl，16通量）
2. 從試劑盒中取出預分裝96深孔板，輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免96深孔板振動，防止液體濺出（注意：室溫低
于15°C時，請在開封使用前將96孔板置于37°C預熱20min，以避免沉淀析出）；
3. 在第1列、第7列溶液中加入約300μl脫蠟消化后的液體樣本；
4. 放置2個8道磁套；選擇附表所列的自動化提取程序，開始提??；客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序，如果有問題，請聯系技術支持；
5. 轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液至RNase-free離心管內，用于后續檢測或-20°C儲存。
| 次序 | 列號 | 程序 | 混合時間（sec.） | 磁吸時間（sec.） | 等待時間（sec.） | 體積（μl） | 混合速度 | 溫度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 600 | 0 | 0 | 800 | 快 | 37 |
| 2 | 2 | 吸磁 | 30 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 3 | 1 | 結合 | 300 | 20 | 0 | 800 | 快 | 37 |
| 4 | 2 | 洗滌1 | 120 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 5 | 3 | 洗滌2 | 60 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 6 | 4 | 洗滌3 | 60 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 7 | 5 | 洗滌4 | 60 | 30 | 120 | 600 | 快 | 室溫 |
| 8 | 6 | 洗脫 | 300 | 60 | 0 | 100 | 快 | 45 |
| 9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
A. RNA得率低，如何解決？
1.取樣前樣品沒有充分消化。樣品取樣前應按照說明條件充分消化。
2.磁珠加樣量不足。請在吸取磁珠前將核酸提取磁珠懸液充分混勻。
3.與磁珠結合不充分。在RNA與磁珠結合過程中請溫和搖勻，確保RNA與磁珠充分結合。
4.樣品沒有按照要求保存導致RNA降解。
B. 獲得的RNA條帶彌散，RNA片段斷裂，如何解決？
1. 樣品冷藏時間過久，沒有按照要求冷凍保存。請使用新鮮及正確保藏的樣品。
2. 操作過程過于劇烈，RNA被機械打斷。請嚴格按照說明書操作。
C. RNA樣品不純，抑制或者干擾后續試驗，如何解決？
1.樣本裂解結合后沒有進行磁珠轉移更換離心管，導致管壁黏附的雜質污染最終提取物。
2.磁珠沒有完全干燥，有乙醇殘留。最后一次洗滌后盡量吸凈離心管內的液體。
3.加入洗脫液之前將磁珠靜置5min左右，確保乙醇完全揮發。
