谷胱甘肽（GST-tag）親和磁珠
分類：谷胱甘肽 (GST-tag) 親和目錄：AE05
產品特性：
| 粒徑：500nm |
| 磁響應性:>30emu/g |
| pH4-10 |
| 最大程度保持蛋白活性 |
| 高純度低背景：非特異性吸附低 |
| 設備簡單 |
谷胱甘肽親和純化磁珠是由超順磁性納米顆粒與谷胱甘肽（glutathione）共價偶聯而成。EmerTher谷胱甘肽親和純化磁珠具有快速磁響應性，高蛋白結
合能力和低非特異性結合，可快速有效地從細胞裂解液中分離純化GST(glutathione-S-transferase)-tag融合蛋白。整個過程簡單快捷，可使用磁分離器操作，或與儀器聯
用達到自動化蛋白純化，適用于高通量應用。
操作流程（示意圖）：
谷胱甘肽（GST-tag）親和磁珠從誘導后的大腸桿菌裂解母液中純化GST蛋白的應用實例見下：
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| AE05001 | 50mg/ml，1ml | 略 |
| AE05002 | 50mg/ml，5ml | 略 |
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【手工實驗步驟】
本實驗步驟提供一般操作流程，針對每個特定融合蛋白，請根據GST-tag融合蛋白純化原理、目標蛋白表達量及其性質進行優化及預處理。
A. 純化步驟
1. 裂解細胞，得到的含GST-tag融合蛋白的細胞裂解液；
2. 吸取1ml含GST-tag融合蛋白的細胞裂解液于1.5ml滅菌離心管中；
3. 加入20μl磁珠，輕柔振蕩懸浮，在4℃下孵育30min；
4. 磁場吸附，棄去上清液；
5. 加入1ml結合/洗滌緩沖液洗滌3次，每次5min，磁場吸附，棄去上清液；
6. 加入100μl含谷胱甘肽的洗脫緩沖液，洗脫15分鐘；磁場吸附，將洗脫液移至滅菌離心管；需要的話可重復洗脫一次，最后合并洗脫液；
7. 進行蛋白濃度測定及SDS-PAGE檢測洗脫產物。
B. 磁珠再生
1. 洗脫目標蛋白后，加入500μl磁珠再生用洗滌液I (6M Urea)洗滌磁珠10min，磁場吸附，棄去上清液；
2. 加入500μl磁珠再生用洗滌液II (含0.1%SDS的0.5M NaCl溶液) 洗滌磁珠2次，每次5min，磁場吸附，棄去上清液；
3. 磁珠用結合/洗滌緩沖液洗滌3次后，重懸于磁珠保存液，于2-8℃保存。
A. GST-tag融合蛋白的回收率低, 怎么解決？
1. 蛋白可能會降解?？稍诩毎呀庖褐刑砑拥鞍酌敢种苿?。
2. 磁珠用量不足。增加磁珠的用量。
3. 樣品中GST-tag融合蛋白含量低。增加樣品的濃度或體積。
B. 使用含谷胱甘肽的洗脫緩沖液，GST-tag融合蛋白沒有完全洗脫下來, 怎么解決？
1. 分子量大的蛋白質一般來說洗脫效率較低，可提高谷胱甘肽在洗脫緩沖液中的濃度至100mM。
2. 洗脫條件過于溫和?？稍谙疵摼彌_液提高NaCl的濃度(最終濃度可達500mM)，以增加洗脫緩沖液的離子強度；在洗脫緩沖液中添加0.1-1％的Triton X-100或Tween-20
的洗滌劑；增加洗脫所用的孵育時間；或增加洗脫緩沖液的體積。
3. 洗脫GST-tag融合蛋白在pH≥8.0時更有效。增加洗脫緩沖液的pH值可能會增加回收率。
C. 在洗脫樣品中發現非特異性蛋白質, 怎么解決？
1. 蛋白可能會降解?？稍诩毎呀庖褐刑砑拥鞍酌敢种苿?。
2. 非特異性蛋白質結合到磁珠上。 可在結合/洗滌緩沖液中添加NaCl (最終濃度可達500mM) 或洗滌劑（如0.01-0.1％的Tween-20），以減少非特異性結合。
