本試劑盒適用于提取血液樣本中RNA。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成:經過獨特的表面修飾的磁珠,結合核酸能力更強、洗脫更容易;操作步驟簡單,操作時間短,可在室溫下完成整個提取過程,適合于快速核酸提取的磁珠自動化過程。
操作流程(示意圖):
磁珠法血液RNA提取試劑盒提取血液樣本RNA的應用實例見下。
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
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RE17001 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
RE17002 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
RE1796B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
RE1760C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
RE1796D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手工提取步驟】
1. 溶解蛋白酶K:按標簽所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解;
2. 取200μl血液樣本,加入20μl蛋白酶K溶液、 600μl裂解吸附液,置于旋轉混和儀,溫和混勻5min;
3. 加入30μl磁珠,置于旋轉混和儀,溫和混勻5min,用磁分離架吸附磁珠,棄上清;
4. 加入600μl洗滌液I洗滌磁珠5min,吸附磁珠,棄上清;
5. 加入600μl洗滌液II洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
6. 加入600μl洗滌液III洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
7. 再次加入600μl洗滌液III洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
8. 吸附磁珠,棄上清;盡量吸除殘留液體;
9. 靜置3-5min,去除乙醇殘留;
10. 加入60μl洗脫液,混合均勻,洗脫5min;
11. 吸附磁珠,回收含核酸洗脫液至另一RNase-free離心管內,用于后續檢測或保存于-20°C冰箱。
【自動化提取步驟(以32通道為例)】
1. RE1796B預裝板設置(96孔深孔板,樣品量200μl,16通量)
2. 從試劑盒中取出預分裝96深孔板,輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜,避免96深孔板振動,防止液體濺出(注意:室溫低
于15°C時,請在開封使用前將96孔板置于37°C預熱20min,以避免沉淀析出);
3. 在第1列、第7列溶液中加入200μl血液樣本和20μl蛋白酶K溶液;
4. 放置2個8道磁套;選擇附表所列的自動化提取程序,開始提??;客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序,如果有問題,請聯系技術支持;
5. 轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液至RNase-free離心管內,用于后續檢測或-20°C儲存。
次序 | 列號 | 程序 | 混合時間(sec.) | 磁吸時間(sec.) | 等待時間(sec.) | 體積(μl) | 混合速度 | 溫度(℃) |
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1 | 1 | 裂解 | 300 | 0 | 0 | 800 | 快 | 37 |
2 | 2 | 吸磁 | 30 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
3 | 1 | 結合 | 300 | 30 | 0 | 800 | 快 | 37 |
4 | 2 | 洗滌1 | 300 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
5 | 3 | 洗滌2 | 120 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
6 | 4 | 洗滌3 | 120 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
7 | 5 | 洗滌4 | 120 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
8 | 6 | 洗脫 | 300 | 60 | 0 | 100 | 快 | 50 |
9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
A.血液RNA得率低的可能原因有哪些?
1. 樣品沒有按照要求保存導致RNA降解。請使用新鮮的或正確保存的樣本。
2. 取樣前樣品沒有充分混勻。樣品取樣前適當將樣品搖勻。
B.RNA提取后的注意事項包含什么?
1. RNA易降解,純化后的產品請盡快使用;或保存于-20°C冰箱。
2. 長期保存請置于-70°C或加入RNase Inhibitor。