磁珠法病毒總核酸(NA)提取試劑盒
分類:病毒總核酸(NA)提取目錄:RD01
產品特性:
高通量:快速完成病毒總核酸提取過程 |
方便:無需高溫洗脫,均可在室溫下進行 |
生物安全:第一步操作即裂解細胞、變性蛋白 |
環境安全:不含苯酚、氯仿等有機試劑 |
穩定:保護易降解RNA |
自動化適用 |
本試劑盒適用于血清、血漿、咽拭子等液體樣本以及固體及半固體樣本中病毒總核酸的提取。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和提取試劑體系組成:經過獨特的表面修飾的磁珠,結合核酸能力更強、洗脫更容易;操作步驟簡單,操作時間短,可在室溫下完成整個提取過程,適合于快速核酸提取的磁珠自動化過程。
操作流程(示意圖):
磁珠法病毒總核酸(NA)在提取血液樣本病毒核酸的應用實例見下。
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
---|---|---|
RD01001 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
RD01002 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
RD0196A | 96份 | Thermo Scientific KingFisher自動純化系統 |
RD0196B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
RD0160C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
RD0196D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手動提取步驟】
1. 在離心管加入200μl樣品溶液(血清、血漿、咽拭子等)、15μl核酸提取磁珠懸浮液、600μl裂解吸附液;
2. 置于旋轉混和儀,溫和混勻15min ;
3. 用磁分離架吸附磁珠,棄上清;
4. 加入600μl洗滌液I,振蕩混合,洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清;
5. 加入600μl洗滌液II洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清;
6. 加入600μl洗滌液III洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清;
7. 再次加入600μl洗滌液III洗滌磁珠1min;
8. 吸附磁珠,棄上清后靜置3-5min,去除乙醇殘留;
9. 加入50μl洗脫液,溫和混勻,洗脫5min;
10. 磁場吸附磁珠,回收含核酸洗脫液至另一RNase-free離心管內,用于后續檢測或-20°C儲存。
【自動化提取步驟(以32通道為例)】
1. RD0196B預裝板設置(96孔深孔板,樣品量200μl,16通量)
2. 從試劑盒中取出預分裝96深孔板,輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜,避免96深孔板振動,防止液體濺出(注意:室溫低
于15°C時,請在開封使用前將96孔板置于37°C預熱20min,以避免沉淀析出);
3. 在第1列、第7列溶液中加入200μl待提取樣本;
4. 放置2個8道磁套;選擇附表所列的自動化提取程序,開始提??;客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序,如果有問題,請聯系技術支持;
5. 轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液至RNase-free離心管內,用于后續檢測或-20°C儲存。
次序 | 列號 | 程序 | 混合時間(sec.) | 磁吸時間(sec.) | 等待時間(sec.) | 體積(μl) | 混合速度 | 溫度(℃) |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | 1 | 裂解 | 300 | 30 | 0 | 800 | 快 | 37 |
2 | 1 | 結合 | 600 | 30 | 0 | 800 | 中 | 37 |
3 | 2 | 洗滌1 | 120 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
4 | 3 | 洗滌2 | 60 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
5 | 4 | 洗滌3 | 60 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
6 | 5 | 洗滌4 | 60 | 30 | 120 | 600 | 快 | 室溫 |
7 | 6 | 洗脫 | 300 | 60 | 0 | 100 | 快 | 60 |
8 | 4 | 移磁珠 | 30 | 0 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
1、提取病毒NA的時候,有哪些需要注意的地方,減少病毒NA的降解?
首先是針對樣本來源的選取以及存儲,其次在實驗中盡量減少等待的時間,以及在實驗結束后,可以選擇低溫(-80°C)保存。
2、固體及半固體樣本怎么預處理?
預處理步驟如下:在樣本中加入適量PBS緩沖液,渦旋振蕩,5000g離心5min,吸取上清液進行總核酸提取。