磁珠法全血總核酸(NA)提取試劑盒
分類：全血總核酸(NA)提取目錄：RD02
產品特性：
| 高通量：快速完成全血總核酸提取 |
| 環境安全：不含苯酚、氯仿等有機試劑 |
| 抗凝劑普適：可用于各種抗凝劑 |
| 自動化適用：為自動化過程精心設計 |
本試劑盒用于全血樣本總核酸提取。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成：經過獨特的表面修飾的磁珠，結合核酸能力更強；洗脫容易，使用TE緩沖液或水即可將血液總核酸從磁珠上洗脫下來；操作簡單、快速，適用于血液總核酸的磁珠自動化提取過程。使用本試劑盒純化的血液總核酸可適用于各種下游操作，包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交、基因測序等實驗。
操作流程（示意圖）：
磁珠法全血總核酸（NA）提取試劑盒在提取血液總核酸的應用實例見下。
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| RD02001 | 20份 | 瓶裝，適用于手工操作及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| RD02002 | 100份 | 瓶裝，適用于手工操作及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| RD0296A | 96份 | Thermo Scientific KingFisher自動純化系統 |
| RD0296B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
| RD0260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
| RD0296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手動提取實驗步驟】
1. 溶解蛋白酶K：按標簽所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液40mg/ml，顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解；
2. 取200-300μl全血樣本放入2ml離心管中，加入20μl蛋白酶K溶液、700μl裂解吸附液、30μl磁珠；
3. 置于旋轉混和儀，充分混勻30min；
4. 用磁分離架吸附磁珠1min，棄上清液；
5. 加入800μl洗滌液I洗滌磁珠，將含磁珠的洗滌液轉移至另一干凈離心管中，顛倒混勻洗滌10min，吸附磁珠，棄上清液；
6. 加入800μl洗滌液II洗滌磁珠3min，吸附磁珠，棄上清液；
7. 加入800μl洗滌液III洗滌磁珠3min，吸附磁珠，棄上清液；
8. 再次加入800μl洗滌液III洗滌磁珠3min，吸附磁珠，棄上清液后靜置3-5min，去除乙醇殘留；
9. 加入100μl洗脫液，60℃混合洗脫10min；
10. 磁場吸附磁珠，回收含基血液總核酸的洗脫液至另一RNase-free離心管，用于后續檢測或-20℃儲存。
其它樣本的預處理
A. 血細胞樣本總核酸的提取
對分離血漿成分后的血細胞樣本進行核酸提取時，請預先用蒸餾水1:1稀釋樣本：取100μl血細胞樣本放入離心管中，加入100μl ddH2O，混合均勻。其余實驗步驟同2-10。
B. 大樣本血液總核酸的提取
取500μl-1000μl新鮮全血樣本放入2ml離心管中，加入1ml紅細胞裂解液（醫脈賽目錄號：CE01001或客戶自備），顛倒數次裂解紅細胞；置于離心機，于轉速350g離心
10min；棄上清，加入200μl ddH2O，混合均勻。其余實驗步驟同2-10。
【自動化提取步驟（以32通道為例）】
1. RD0296B預裝板設置（96孔深孔板，樣品量200μl，16通量）
2. 從試劑盒中取出預封裝96深孔板，輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免96深孔板振動，防止液體濺出（注意：室溫低
于15℃ 時，請在使用前將96孔板置于37℃ 預熱20min，以避免沉淀析出）；
3. 在第1列、第7列中加入200μl樣本和20μl蛋白酶K溶液；
4. 放置2個8道磁套；選擇附表所列的自動化提取程序，開始提??；客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序，如果有問題，請聯系技術支持；
5. 轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液，用于后續檢測或-20℃ 儲存。
| 次序 | 列號 | 程序 | 混合時間（sec.） | 磁吸時間（sec.） | 等待時間（sec.） | 體積（μl） | 混合速度 | 溫度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 900 | 0 | 0 | 900 | 快 | 50 |
| 2 | 2 | 吸磁 | 30 | 20 | 0 | 800 | 中 | 室溫 |
| 3 | 1 | 結合 | 600 | 30 | 0 | 900 | 快 | 50 |
| 4 | 2 | 洗滌1 | 600 | 20 | 0 | 800 | 快 | 室溫 |
| 5 | 3 | 洗滌2 | 240 | 20 | 0 | 800 | 快 | 室溫 |
| 6 | 4 | 洗滌3 | 180 | 20 | 0 | 800 | 快 | 室溫 |
| 7 | 5 | 洗滌4 | 180 | 30 | 60 | 800 | 快 | 室溫 |
| 8 | 6 | 洗脫 | 420 | 60 | 0 | 200 | 快 | 70 |
| 9 | 4 | 移動磁場 | 30 | 0 | 0 | 800 | 快 | 室溫 |
1.全血樣本總核酸得率低的原因是什么，如何解決？
1）取樣前樣品沒有充分混勻。血液樣品取樣前適當將樣品搖勻，使白細胞均勻懸浮于血樣中。
2）磁珠加樣量不足。請在吸取磁珠前將核酸提取磁珠懸液充分混勻。
3）與磁珠結合不充分。在核酸與磁珠結合過程中請溫和搖勻，確保與磁珠充分結合。
4）樣品沒有按照要求保存導致核酸降解。
2.全血樣本中無RNA條帶的原因是什么，如何解決？
RNA易降解，請使用1）新鮮樣本；2）-80℃ 短期保存樣本；
3）加入RNA保存液， -20℃ 保存樣本；4）其他正確抑制RNase的血液保存方法。
