鎳親和純化磁珠是由超順磁性納米顆粒與Ni-NTA（nickel-chargednitrilotriacetic acid）共價偶聯而成。EmerTher鎳親和純化磁珠具有快速磁響應性，高蛋白結合能力和低非特異性結合，可快速有效地從細胞粗提液中分離純化His-tag融合蛋白。
操作流程（示意圖）：
鎳（His-tag）親和純化磁珠的應用實例見下：
1）純化鎳融合蛋白
2）圖一：IPTG誘導重組大腸桿菌過表達綠色熒光蛋白（GFP），經NI親和磁珠純化過的綠色熒光蛋白結果圖，其中GFP母液為超聲破碎大腸桿菌懸液，GFP為純化后的目的蛋白綠色熒光蛋白。
圖二：IPTG誘導重組大腸桿菌過表達綠色熒光蛋白（GFP）及紅色熒光蛋白（RFP），經Ni親和磁珠純化前后的GFP及RFP溶液在紫外光照射下發出熒光圖。
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| AE04001 | 50mg/ml，1ml | 略 |
| AE04002 | 50mg/ml，5ml | 略 |
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【手工實驗步驟】
本實驗步驟提供一般操作流程，針對每個特定融合蛋白，請根據His-tag融合蛋白純化原理、目標蛋白表達量及其性質進行優化及預處理。
A. 純化步驟
根據His-tag融合蛋白的表達情況，相應選擇非變性條件或變性條件所需緩沖液來純化：如果His-tag融合蛋白已經釋放到細胞裂解液中，可使用非變性條件下純化；如果
His-tag融合蛋白還在包涵體中，需在變性條件下釋放蛋白后再純化。
1. 振蕩懸浮磁珠，吸取20μl磁珠（1mg）加入1.5ml滅菌離心管中；
2. 加500μl His-tag結合緩沖液或變性結合緩沖液，洗滌磁珠，磁場吸附，棄去上清液；
3. 將磁珠重懸于200-750μl His-tag結合緩沖液中或變性結合緩沖液；
4. 加入等體積200-750μl細胞裂解液，輕柔振蕩懸浮，在室溫孵育30min；
5. 磁場吸附，棄去上清液；
6. 加入1ml 洗滌緩沖液洗滌3-5次，每次5min，磁場吸附，棄去上清液；
7. 加入100μl含500mM imidazole的洗脫緩沖液，洗脫15分鐘；
8. 磁場吸附，將洗脫緩沖液移至干凈的滅菌離心管；需要的話可重復洗脫一次，合并洗脫液；
9. 使用蛋白濃度測定及SDS-PAGE檢測洗脫產物。
B. 磁珠再生
1. 洗脫目標蛋白后，加入500μl剝離緩沖液處理磁珠3次，每次5min；
2. 磁場吸附，棄去上清液；加入500μl蒸餾水洗滌3次后，加入1ml再生平衡液，平衡30min；
3. 磁場吸附，棄去上清液；磁珠重懸并保存于20%乙醇溶液。
A. His-tag融合蛋白的回收率低，怎么解決？
1. 蛋白可能會降解；可在細胞裂解液中添加蛋白酶抑制劑。
2. 磁珠用量不足；增加磁珠的用量。
3. 樣品中His-tag融合蛋白含量低。提高蛋白表達量或增加樣品的用量。
B. 蛋白純度差，怎么解決？
洗滌不足；調整咪唑在結合緩沖液和/或洗滌緩沖液中的濃度。洗滌磁珠至少兩次以上。
C. 在洗脫樣品中發現非特異性蛋白質，怎么解決？
1. 蛋白可能會降解?？稍诩毎呀庖褐刑砑拥鞍酌敢种苿?。
2. 非特異性蛋白質結合到磁珠上。調整結合、洗滌和洗脫緩沖液中的咪唑濃度。
