磁珠法石蠟包埋樣品DNA提取試劑盒
分類：石蠟包埋樣本DNA提取目錄：DE02
產品特性：
| 保護操作人員健康，環境安全 |
| 高通量：快速完成石蠟包埋樣本DNA提取 |
| 增強腫瘤和其他疾病診斷和靶向治療準確性 |
| 高效去交聯效果 |
| 自動化適用 |
本試劑盒用于石蠟包埋組織中基因組DNA的提取。試劑盒不使用二甲苯作為石蠟溶劑，從而增加操作人員和環境的安全性；經過獨特的表面修飾的磁珠，結合核酸能力更強，洗脫更容易；操作步驟簡單，適合于基因組DNA的磁珠自動化提取過程。本試劑盒純化的DNA可直接用于各種下游操作，包括PCR、文庫構建、測序分析等。
操作流程（示意圖）：
磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取試劑盒在腫瘤病人FFPE樣本提取核酸的應用實例、與國際金標準試劑盒比較和通過石蠟包埋樣本所提取的gDNA的real-time PCR實驗驗證提取效果的實例見下。
醫脈賽（EmerTher）磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取試劑盒在腫瘤病人FFPE樣本提取核酸的應用實例。
1.樣本
四名腫瘤病人FFPE樣本（3片10μm厚的石蠟切片組織樣本/每人）
2.試劑
Emerther磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取試劑盒
3.核酸提取方法
EmerTher磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取試劑盒，用自動核酸提取儀提取
A、 脫蠟
1. 溶解蛋白酶K：按標簽所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解；
2. 取一定量石蠟包埋組織（如1-5片10μm厚的石蠟切片組織樣本），轉移至1.5ml離心管中；
3. 加入300μl石蠟樣本液，150μl ATL和20μl蛋白酶K溶液，置于56°C 恒溫水浴鍋孵育1hr ，期間混勻3-5次。也可消化過夜；
B、消化
4. 在組織樣本中加入150μl石蠟消化液，置于85°C恒溫水浴鍋孵育30min；
C、 DNA提取
5. 15000g離心5min；
6. 小心吸取全部下層液體，加入375μl裂解吸附液、30μl核酸提取磁珠，置于旋轉混合儀，溫和混勻20min；
7. 用磁分離架吸附磁珠1min，棄上清；
8. 加入700μl洗滌液I洗滌磁珠，顛倒混勻洗滌1min，吸附磁珠，棄上清；
9. 再次加入700μl洗滌液I洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
10. 加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
11. 再次加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min，吸附磁珠；
12. 盡量吸棄上清后靜置5min，去除乙醇殘留；
13. 加入100μl洗脫液，50°C混合均勻洗脫5min；
14. 磁場吸附磁珠，回收含基因組DNA的洗脫液至另一干凈離心管內；
15. 用于后續檢測或-20℃儲存。
4.結果：提取的DNA產量高、純度高，方便進行下一步的PCR擴增。
磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取試劑盒與目前市場上國際金標準試劑盒的比較。
磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取試劑盒所提取gDNA的real-time PCR實驗，用以驗證醫脈賽（Emerther）磁珠法石蠟包埋樣本DNA提取效果。（石蠟包埋樣本編號：1603089）
實驗結論
包埋樣本DNA提取試劑盒從5片石蠟樣本切片中大約可以提取4微克genomic DNA。用所得gDNA做GAPDH的real-time PCR獲得曲線較好，
且提取所得DNA的OD值（260/280）分別為1.81，1.90，說明所得DNA質量良好。由于該DAN提取試劑盒所提取的DNA量較多，且質量良好，證明試劑盒效果良好。
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| DE02001 | 20份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| DE02002 | 100份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| DE0296B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
| DE0260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
| DE0296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
我們提供了多種訂購渠道和訂購方式：
1.直接電話聯系我們：400-880-7356；021-60556823
2.直接郵箱聯系我們：order@emerther.cn
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【手動提取步驟】
A、 脫蠟
1. 溶解蛋白酶K：按標簽所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解；
2. 取一定量石蠟包埋組織（如1-5片10μm厚的石蠟切片組織樣本），轉移至1.5ml離心管中；
3. 加入300μl石蠟樣本液，150μlATL和20μl蛋白酶K，置于56°C 恒溫水浴鍋孵育1hr，期間混勻3-5次。也可消化過夜；
B、消化
4. 在組織樣本中加入150μl石蠟消化液，置于85oC恒溫水浴鍋孵育30min；
C、DNA提取
5. 15000g離心5min；
6. 小心吸取全部下層液體，加入375μl裂解吸附液、30μl核酸提取磁珠，置于旋轉混合儀，溫和混勻20min；
7. 用磁分離架吸附磁珠1min，棄上清；
8. 加入700μl洗滌液I洗滌磁珠，顛倒混勻洗滌1min，吸附磁珠，棄上清；
9. 再次加入700μl洗滌液I洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
10. 加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
11. 再次加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min，吸附磁珠；
12. 盡量吸棄上清后靜置5min，去除乙醇殘留；
13. 加入100μl洗脫液，50°C混合均勻洗脫5min；
14. 磁場吸附磁珠，回收含基因組DNA的洗脫液至另一干凈離心管內；
15. 用于后續檢測或-20℃儲存。
【自動化提取步驟（以32通道為例）】
1.DE0296B預裝板設置（96空深孔板，樣品量：15000g離心后取全部下層液體，16通量）
2.從試劑盒中取出預分裝96深孔板，輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免96深孔板振動，防止液體濺出（注意：室溫低于
15℃時，請在開封使用前將96孔板置于37℃預熱20min，以避免沉淀析出）；
3.在第1列、第7列中加入脫蠟消化后的全部樣本（下層液體）；
4.放置2個8道磁套；根據附表所列的自動化提取程序，開始提??；客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序，如果有問題，請聯系技術支持；
5.轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液，用于后續檢測或-20℃儲存。
| 步驟 | 空位 | 名稱 | 混合時間 （sec.） | 磁吸時間 （sec.） | 等待時間 （sec.） | 容積 （μl） | 混合速度 | 溫度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 600 | 0 | 0 | 700 | 快 | 37 |
| 2 | 2 | 吸磁 | 30 | 30 | 0 | 750 | 中 | 室溫 |
| 3 | 1 | 結合 | 300 | 30 | 0 | 700 | 快 | 37 |
| 4 | 2 | 洗滌1 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
| 5 | 3 | 洗滌2 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
| 6 | 4 | 洗滌3 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
| 7 | 5 | 洗滌4 | 120 | 30 | 120 | 700 | 快 | 室溫 |
| 8 | 6 | 洗脫 | 300 | 60 | 0 | 100 | 中 | 50 |
| 9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
1、試劑中是否還有有毒試劑？
我們的試劑不含有二甲苯等有毒試劑，可以在保護實驗室操作人的安全下快速方便的進行提取。
2、過夜消化與消化3h的差異？
過夜消化的提取效果更好，但是要是時間緊迫，3h消化液足以滿足實驗要求。
