本試劑盒適合于從血漿等無細胞組織液中提取游離DNA(Circulating free DNA, cfDNA)片段。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成:含經過獨特的表面修飾的磁珠,結合核酸能力更強、洗脫更容易,使用水即可將核酸從磁珠上洗脫下來;純化的DNA片段可直接用于各種下游操作,包括基因測序(例如無創產前基因檢測、腫瘤檢測)、文庫構建等。本產品可用于自動化核酸提取儀上提取微量DNA。
操作流程(示意圖):
磁珠法血漿游離DNA提取試劑盒在人血漿樣本提取cfDNA的應用實例見下。
1)用醫脈賽磁珠法cfDNA提取試劑盒對23個不同人血漿樣本(5個腫瘤患者,18個體檢者)使用自動化核酸提取儀提取cfDNA,50μL洗脫液洗脫。
cfDNA濃度使用AccuBlue High Sensitivity dsDNA Auantitation Kit檢測,23個樣本檢測結果如下
2)使用磁珠法cfDNA提取試劑盒提取cfDNA后的Agilent 2100測試結果:
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
---|---|---|
DE03001 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03002 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03011 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03012 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03021 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03022 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03041 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE03042 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
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【手工提取步驟(樣本的提取體積可變,一次可處理200μl-4ml血漿樣本,以下以400μl和2ml為例說明)】
[A] 400μl樣本量實驗步驟:
1. 將蛋白酶K和PK溶解液混合,配制成蛋白酶K溶液(20mg/ml);
2. 取400μl血漿樣品至2ml 離心管中注1,加入40μl蛋白消化液、10μl蛋白酶K溶液, 混勻后56oC孵育15min;
3. 取出離心管,加入500μl核酸結合液、10μl核酸提取磁珠,置于旋轉混合儀,溫和混勻30min;
4. 用磁分離架吸附磁珠1min,棄上清;
5. 加入500μl洗滌液 I 洗滌磁珠,顛倒混勻洗滌2min,吸附磁珠,棄上清;
6. 加入500μl洗滌液 II,將溶液轉移至干凈的離心管中;
7. 洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
8. 盡量吸除殘留液體后,靜置2min注2,去除乙醇殘留;
9. 加入30μl洗脫液 (TE緩沖液或雙蒸水適用),混合均勻,置于56℃水浴洗脫5min;
10. 磁場吸附磁珠,回收含cfDNA的洗脫液至另一干凈離心管內;
11. 進行DNA檢測及后續實驗。
[B] 2ml樣本量實驗步驟
1. 將蛋白酶K和PK溶解液混合,配制成蛋白酶K溶液(20mg/ml);
2. 取2ml血漿樣品至10ml 離心管中注1,加入200μl蛋白消化液、50μl蛋白酶K溶液,混勻后56oC孵育15min;
3. 取出離心管,加入2500μl核酸結合液、50μl核酸提取磁珠,置于旋轉混合儀,溫和混勻30min;
4. 用磁分離架吸附磁珠1min,棄上清;
5. 加入1000μl洗滌液 I 洗滌磁珠,轉移至2ml新離心管注1,顛倒混勻洗滌2min,吸附磁珠,棄上清;
6. 加入1000μl洗滌液 II, 將液體轉移至干凈的離心管;
7. 洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
8. 盡量吸除殘留液體后,靜置2min注2,去除乙醇殘留;
9. 加入50μl洗脫液 (TE緩沖液或ddH2O適用),混合均勻,置于56oC水浴洗脫5min;
10. 磁場吸附磁珠,回收含cfDNA的洗脫液至另一干凈離心管內;
11. 進行DNA檢測及后續實驗。
1.手動提取過程中有什么需要注意的呢?
? 洗滌液II洗滌后,盡量將殘留液體去除后,讓樣品靜置2-5min左右以揮發乙醇,然后加入洗脫液。如乙醇殘留太多會對后續檢測有一定影響;但樣品如果過于干燥,可能
導致DNA不容易從磁珠上洗脫下來,減少提取量。
? 洗脫液量和洗脫次數:減少洗脫液量可提高提取濃度,但可能降低總提取量;同等體積的洗脫液少量多次洗脫可提高總提取量。
? 洗脫時輕微振蕩離心管有助于核酸溶解。