本試劑盒用于組織基因組DNA提取。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成,其中DNA提取的操作過程都可在室溫下進行,因此也非常適合于基因組DNA的磁珠自動化提取過程。
使用本試劑盒純化的基因組DNA可適用于各種下游操作,包括酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交、基因測序等實驗。
操作流程(示意圖):
磁珠法組織DNA提取試劑盒在提取組織DNA的應用實例見下。
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
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DE05001 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE05002 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE0596B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
DE0560C | 60份 | Thermo Scentific KingFisher mL磁珠提取儀 |
DE0596D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手工提取操作】
1.溶解蛋白酶K:按標簽所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解;
2.稱取5-10mg組織碎片至離心管中,加入300μl組織消化液A、20μl蛋白酶K溶液,混合后置于56°C恒溫水浴孵育45min,期間搖勻或用槍吸打(使組織充分分散,加速消
化),直到消化完全;
3.吸取200μl消化好的液體樣本至離心管中,加入600μl裂解吸附液和30μl核酸提取磁珠,置于旋轉混和儀,充分混勻25min;
4.用磁分離架吸附磁珠,棄上清液;
5.加入700μl洗滌液I洗滌磁珠,將含磁珠的洗滌液轉移至另一干凈離心管中,顛倒混勻洗滌1min,吸附磁珠,棄上清液;
6.再次加入700μl洗滌液I洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清液;
7.加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清液;
8.再次加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min,將含磁珠的洗滌液移至另一干凈離心管中;
9.吸附磁珠,棄上清液后靜置5min,去除乙醇殘留;
10.加入100μl洗脫液,混和洗脫5min;
11.磁場吸附磁珠,回收含基因組DNA的洗脫液至另一離心管,進行DNA檢測及后續實驗。
【自動化提取步驟(以32通道為例)】
1.DE0596B預裝板設置(96空深孔板,樣品量:15000g離心后取全部下層液體,16通量)
2.從試劑盒中取出預分裝96深孔板,輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜,避免96深孔板振動,防止液體濺出(注意:室溫低于
15℃時,請在開封使用前將96孔板置于37℃預熱20min,以避免沉淀析出);
3.在第1列、第7列中加入脫蠟消化后的全部樣本(下層液體);
4.放置2個8道磁套;根據附表所列的自動化提取程序,開始提??;客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序,如果有問題,請聯系技術支持;
5.轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液,用于后續檢測或-20℃儲存。
步驟 | 孔位 | 名稱 | 混合時間(sec.) | 磁吸時間(sec.) | 等待時間(sec.) | 容積(μl) | 混合速度 | 溫度(℃) |
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1 | 1 | 裂解 | 600 | 0 | 0 | 900 | 快 | 37 |
2 | 2 | 吸磁 | 30 | 30 | 0 | 750 | 中 | 室溫 |
3 | 1 | 結合 | 300 | 30 | 0 | 900 | 快 | 37 |
4 | 2 | 洗滌1 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
5 | 3 | 洗滌2 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
6 | 4 | 洗滌3 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
7 | 5 | 洗滌4 | 120 | 30 | 240 | 700 | 快 | 室溫 |
8 | 6 | 洗脫 | 300 | 60 | 0 | 100 | 中 | 50 |
9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
1. 室溫低于15°C時,請在開封使用前將板A置于37°C預熱20min,以避免沉淀析出。
2. 板中的裂解吸附液含蛋白變性劑,具有腐蝕性,若不慎濺到皮膚,請用大量水沖洗。