磁珠法病毒DNA提取試劑盒
分類：病毒DNA提取目錄：DE06
產品特性：
| 高通量：快速完成病毒DNA提取過程 |
| 方便：無需高溫洗脫，減少揮發和交叉污染 |
| 生物安全：第一步操作即裂解細胞、變性蛋白 |
| 自動化適用 |
本試劑盒用于提取血清、血漿、咽拭子等液體樣本中的病毒核酸（DNA）。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成：經過獨特的表面修飾的磁珠，結合核酸能力更強；操作步驟簡單，操作時間短，整個操作過程可在室溫下進行，適合于病毒DNA的磁珠自動化提取過程。
操作流程（示意圖）：
磁珠法病毒DNA提取試劑盒在血清梯度樣本提取HBV病毒的應用實例見下。
1）從血清梯度樣本提取HBV病毒DNA進行熒光定量PCR檢測
· 提取的病毒DNA檢測擴增曲線的濃度線性程度佳
· 更好去除PCR抑制劑，內參擴增曲線重復性好
· 常溫提取，減少溶劑揮發和交叉污染
2）兩種磁珠法病毒DNA提取試劑的比較（樣本檢測DNA病毒RT-PCR擴增曲線如下：E代表使用醫脈賽磁珠法病毒核酸提取試劑盒的結果，CON代表使用對照國外試劑盒的結果）
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| DE06001 | 20份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等自動移液工作站 |
| DE06002 | 100份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等自動移液工作站 |
| DE06003 | 500份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等自動移液工作站 |
| DE0696A | 96份 | Thermo Scientific KingFisher自動純化系統 |
| DE0696B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
| DE0660C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
| DE0696D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手動提取步驟】
1. 溶解蛋白酶K：按標簽所示，吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml，顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解；
2. 將液體樣本混合均勻，取200μl樣本放入2ml離心管中，加入20μl蛋白酶K、700μl裂解吸附液、30μl提取磁珠，置于旋轉混和儀，充分混勻20min；
3. 用磁分離架吸附磁珠，棄上清液；
4. 加入700μl洗滌液I洗滌磁珠，將含磁珠的洗滌液轉移至另一干凈離心管中，顛倒混勻洗滌1min，吸附磁珠，棄上清液；
5. 加入700μl洗滌液II洗滌磁珠1min；
6. 吸附磁珠，棄上清液后靜置5min，去除乙醇殘留；
7. 加入60μl洗脫液，混和洗脫5min；
8. 磁場吸附磁珠，回收含病毒DNA的洗脫液至另一離心管，進行DNA檢測及后續實驗。
【自動化核酸提取流程（以32通道為例）】
1.DE0696B預裝板設置（96孔深孔板，樣品量200μl，16通量）
2.從試劑盒中取出預封裝96深孔板，輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免96深孔板振動，防止液體濺出（注意：室溫低于
15°C時，請在使用前將96孔板置于37°C預熱20min，以避免沉淀析出）；
3.在第1列、第7列中加入200μl樣本和20μl蛋白酶K溶液；
4.放置2個8道磁套；選擇附表所列的自動化提取程序，開始提??；客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序，如果有問題，請聯系技術支持；
5.轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液，用于后續檢測或-20°C儲存。
| 步驟 | 孔位 | 名稱 | 混合時間（sec.） | 磁吸時間（sec.） | 等待時間（sec.） | 容積（μl） | 混合速度 | 溫度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解 | 300 | 0 | 0 | 900 | 快 | 37 |
| 2 | 1 | 結合 | 600 | 0 | 0 | 700 | 快 | 37 |
| 3 | 1 | 吸磁 | 30 | 30 | 0 | 700 | 中 | 室溫 |
| 4 | 2 | 洗滌1 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
| 5 | 3 | 洗滌2 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
| 6 | 4 | 洗滌3 | 120 | 20 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
| 7 | 5 | 洗滌4 | 120 | 30 | 240 | 700 | 快 | 室溫 |
| 8 | 6 | 洗脫 | 120 | 60 | 0 | 60 | 中 | 50 |
| 9 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 700 | 快 | 室溫 |
1、手動提取時，洗脫前是否可以將樣本放進烘箱揮發樣本中乙醇？
答：不可以，洗滌液II洗滌后，盡量將殘留液體去除后，讓樣品在室溫下靜置3-5min或更長時間以揮發乙醇，然后加入洗脫液。如乙醇殘留太多會對后續檢測有一定影響；
但樣品如果過于干燥，可能導致DNA不容易從磁珠上洗脫下來，減少提取量。
2、能否更換為ddH20進行洗脫？
答：洗脫液可以用TE緩沖液（pH7.5-8.5）或雙蒸水。
3、液體樣本使用量為多少？
答：液體樣本使用量可為10-400μl，最佳為200-300μl。
