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磁珠法質粒DNA提取試劑盒

分類:質粒提取目錄:DE08

產品特性:

高通量
方便
自動化適用


適合于簡單快捷提取質粒,快速從培養細菌中獲得大量的質粒DNA,經過獨特的表面修飾的磁珠,結合核酸能力更強、洗脫更容易,使用水即可將核酸從磁珠洗脫下來;提取的DNA可直接用于PCR、酶切、測序、轉化等生物學實驗。

操作流程(示意圖):






磁珠法質粒DNA提取試劑盒在菌液樣本抽提質粒的應用實例見下。






目錄號規格適用機型
DE0800120份瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站
DE08002100份瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站
DE08003500份瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站


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【手工提取步驟】

1. 取1-5ml過夜培養的菌液加入離心管中,5000g離心1min;

2. 棄上清,收集菌體沉淀;

3. 在離心管中加入100μl溶液I和10μl RNaseA溶液,充分混勻,懸浮菌體沉淀;

4. 加入150μl溶液II,溫和上下顛倒混勻4-6次;

5. 向離心管中加入150μl溶液III,立即溫和地上下顛倒混勻4-6次(出現大量白色絮狀物),或用移液槍吸打混勻,直至溶液澄清,白色絮狀物完全析出(如需完全降解

RNA,建議靜置10min);

6. 15,000g離心5分鐘;

7. 將步驟6中所得的上清液轉移到另一離心管,加入25μl核酸提取磁珠、200μl 結合液,上下顛倒溫和混勻1-2min;

8. 用磁分離架吸附磁珠1min,棄上清;

9. 加入800μl 75%乙醇溶液洗滌磁珠兩次;

10. 吸附磁珠,棄上清后靜置5min,去除乙醇殘留;

11. 加入100μl洗脫液,置于室溫,混和均勻洗脫5min(56oC洗脫效果更佳);

12. 磁場吸附磁珠,回收含質粒DNA的洗脫液至另一干凈離心管內,進行DNA檢測及后續實驗。




1、未提出質?;蛸|粒得率較低,如何解決?

A. 大腸桿菌老化:涂布平板培養后,重新挑選新菌落進行液體培養。

B. 質??截悢档停河捎谑褂玫涂截悢递d體引起的質粒DNA提取量低,可更換具有相同功能的高拷貝數載體。

C. 菌體中無質粒:有些質粒本身不能在某些菌種中穩定存在,經多次轉接后有可能造成質粒丟失。例如,柯斯質粒在大腸桿菌中長期保存不穩定,因此不要頻繁轉接,每次

接種時應接種單菌落。另外,檢查篩選用抗生素使用濃度是否正確。

D. 堿裂解不充分:使用過多菌體培養液,會導致菌體裂解不充分,可減少菌體用量或增加溶液的用量。對低拷貝數質粒,提取時可加大菌體用量并加倍使用溶液,可以有助

于增加質粒提取量和提高質粒質量。

E. 質粒未全部溶解 (尤其質粒較大時) :洗脫溶解質粒時,可適當加溫或延長溶解時間。

F. 乙醇殘留:洗滌液洗滌后應離心盡量去除殘留液體,再加入洗脫緩沖液。

2、 怎樣提取不同體積的菌液?

A.可以同比例調整試劑的用量達到提取不同體積的菌液的目的。

B.對于大體積菌液,建議使用強磁板,可以加速提取過程。




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