本試劑盒用于提取糞便樣本DNA。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成:經過獨特的表面修飾的磁珠,結合核酸能力更強;只使用一
種溶液裂解細胞并使DNA成分與磁珠結合;洗脫容易,使用TE緩沖液或水即可將基因組DNA從磁珠洗脫下來;操作步驟簡單,操作時間短,整個操作過程都可在室溫下進
行,因此也非常適合于基因組DNA的磁珠自動化提取過程。
操作流程(示意圖):
編號 | 濃度(ng/μL) | OD值(260/280) | OD值(260/230) | 洗脫體積(μL) | DNA總量(μg) |
---|---|---|---|---|---|
樣本1 | 506.23 | 1.795 | 1.697 | 100 | 50.62 |
樣本2 | 489.69 | 1.813 | 1.719 | 100 | 48.90 |
樣本3 | 504.91 | 1.846 | 1.823 | 100 | 50.49 |
樣本4 | 497.74 | 1.803 | 1.736 | 100 | 49.78 |
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
---|---|---|
DE12001 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE12002 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE1296B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
DE1260C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
DE1296D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手工提取步驟】
1.取100-200mg的糞便樣本于2ml含玻璃珠的研磨離心管中(若糞便樣本為液態,取200μl于離心管中),使用四維旋轉混勻儀漩渦混勻(40Hz,240s);(注意:如需提取病
毒或脫落細胞核酸,可使用實驗室漩渦振蕩儀混勻后,進行步驟2操作。)
2.取出研磨離心管,6500g離心5min,取200-300μl上清液至2ml新離心管;
3.加入700μl核酸吸附液,置于旋轉混和儀,溫和混勻10min;
4.加入30μl提取磁珠,置于旋轉混和儀,溫和混勻5min;
5.用磁分離架吸附磁珠,棄上清;
6.加入700μl洗滌液I 洗滌磁珠,顛倒混勻洗滌1min,吸附磁珠,棄上清;
7.再次加入700μl洗滌液I 洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清;
8.加入700μl洗滌液II 洗滌磁珠1min,吸附磁珠,棄上清;
9.再次加入700μl洗滌液II 洗滌磁珠1min,將含磁珠的洗滌液移至另一干凈離心管中;
10.吸附磁珠,棄上清后靜置5min,去除乙醇殘留;
11.加入100μl洗脫液,混和均勻,洗脫5min;
12.磁場吸附磁珠,回收含基因組DNA的洗脫液至另一干凈離心管內,進行DNA檢測及后續實驗。
1. 獲得的DNA條帶彌散,DNA片段斷裂,有什么原因呢?
A.樣品沒有按照要求保存,請使用新鮮及正確保存的樣品。
B.操作過程過于劇烈,DNA被機械打斷,請嚴格按照說明書操作。
2. DNA樣品不純,抑制或者干擾后續試驗,有什么原因呢?
A.磁珠沒有完全干燥,有乙醇殘留,最后一次洗滌后盡量吸凈離心管內的液體。
B.加入洗脫液之前將磁珠室溫靜置3-5min,確保乙醇完全揮發,也要避免過度干燥導致DNA不容易從磁珠上洗脫下來,減少提取量。