本試劑盒用于提取樣本中微生物基因組DNA。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成:經過獨特的表面修飾的磁珠,結合核酸能力更強;只使用一種溶液裂解細胞并使DNA成分與磁珠結合;洗脫容易,使用TE緩沖液或水即可將基因組DNA從磁珠洗脫下來;操作步驟簡單,操作時間短,整個操作過程都可在室溫下進行,因此也非常適合于基因組DNA的磁珠自動化提取過程。
操作流程(示意圖):略。
略。
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
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DE16001 | 20份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE16002 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DE1696B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
DE1696D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手工提取步驟】
1. 溶解蛋白酶K:按標簽所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,顛倒混勻數次讓蛋白酶K充分溶解;
2. 取300μl液體樣本于2ml含玻璃珠的研磨離心管中(若樣本為固體樣本:取20-50mg的樣本,加入滅菌水至300μl),使用四維旋轉混勻儀漩渦混勻(40Hz,240s);(注
意:如需提取復雜樣本中病毒或細胞核酸,可使用實驗室漩渦振蕩儀混勻后,進行步驟3操作。)
3. 取出研磨離心管,6500g離心5min,取300μl上清液至2ml新離心管;
4. 加入700μl核酸吸附液,20μl蛋白酶K溶液,置于旋轉混和儀,溫和混勻10min;
5. 加入30μl提取磁珠,置于旋轉混和儀,溫和混勻10min;
6. 用磁分離架吸附磁珠,棄上清;
7. 加入900μl洗滌液I 洗滌磁珠,顛倒混勻洗滌5min,吸附磁珠,棄上清;
8. 再次加入900μl洗滌液I 洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
9. 加入900μl洗滌液II洗滌磁珠2min,吸附磁珠,棄上清;
10. 再次加入900μl洗滌液II洗滌磁珠2min,將含磁珠的洗滌液移至另一干凈離心管中;
11. 吸附磁珠,棄上清后靜置3min,去除乙醇殘留;
12. 加入100μl洗脫液,混和均勻,洗脫5min;
13. 磁場吸附磁珠,回收含基因組DNA的洗脫液至另一干凈離心管內,進行DNA檢測及后續實驗。
【全自動提取步驟(以32通道為例)】
1. DE1696B預裝板設置(96孔深孔板,樣品量300μl,16通量)
2. 取出預分裝96深孔板,輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜,避免96深孔板振動,防止液體濺出(注意:室溫低于15°C時,請在開封使用前將96孔板置于37°C預熱20min,以避免沉淀析出);
3. 第1、7列中加入處理好的樣本溶液300μl和20μl蛋白酶K溶液;
4. 放置2個8道磁套;選擇附表所列的自動化提取程序開始提取; 客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序,如果有問題,請聯系技術支持;
5. 轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液,用于后續檢測或-20℃儲存。
次序 | 列號 | 程序 | 混合時間(sec.) | 磁吸時間(sec.) | 等待時間(sec.) | 體積(μl) | 混合速度 | 溫度(℃) |
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1 | 1 | 裂解 | 600 | 0 | 0 | 900 | 快 | 37 |
2 | 2 | 吸磁 | 30 | 20 | 0 | 900 | 中 | 室溫 |
3 | 1 | 結合 | 900 | 20 | 0 | 900 | 快 | 37 |
4 | 2 | 洗滌1 | 300 | 20 | 0 | 900 | 快 | 室溫 |
5 | 3 | 洗滌2 | 300 | 20 | 0 | 900 | 快 | 室溫 |
6 | 4 | 洗滌3 | 180 | 20 | 0 | 900 | 快 | 室溫 |
7 | 5 | 洗滌4 | 180 | 30 | 180 | 900 | 快 | 室溫 |
8 | 6 | 洗脫 | 420 | 60 | 0 | 100 | 中 | 50 |
9 | 4 | 移動磁場 | 30 | 0 | 0 | 900 | 快 | 室溫 |
略。