磁珠法病毒RNA提取試劑盒
分類：病毒RNA提取目錄：RE01
產品特性：
| 高通量：自動快速完成病毒RNA核酸提取 |
| 環境安全：不含苯酚、氯仿等有機試劑 |
| 生物安全：第一步操作即裂解細胞、變性蛋白 |
| 穩定：保護易降解RNA |
| 方便：無需高溫洗脫，減少揮發和交叉污染 |
| 自動化適用 |
本試劑盒適用于提取咽拭子等液體樣本中病毒RNA。試劑盒由高效吸附核酸的超順磁性納米微球和安全環保的提取試劑體系組成：經過獨特的表面修飾的磁珠，結合核酸能力更強、洗脫更容易；操作步驟簡單，操作時間短，可在室溫下完成整個提取過程，適合于快速核酸提取的磁珠自動化過程。
操作流程（示意圖）：
磁珠法病毒RNA提取試劑盒與國外試劑盒對照和隨機陽性血清提取HCV病毒的應用實例見下。
1）醫脈賽（EmerTher）磁珠法病毒RNA提取試劑盒隨機陽性血清提取HCV病毒RNA進行熒光定量PCR檢測
結果表明：1.醫脈賽（Emerther）磁珠法病毒RNA提取試劑盒提取檢測HCV擴增曲線佳；2.內參擴增曲線重復性好
2）磁珠法病毒RNA提取試劑盒與國外試劑盒相對照，圖示為血漿樣本檢測病毒RNA的RT-PCR擴增曲線
| 目錄號 | 規格 | 適用機型 |
|---|---|---|
| RE01001 | 20份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| RE01002 | 100份 | 瓶裝，適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
| RE0196A | 96份 | Thermo Scientific KingFisher自動純化系統 |
| RE0196B | 96份 | 醫脈賽、圓點、奧盛、天隆、天根等品牌多種純化機型 |
| RE0160C | 60份 | Thermo Scientific KingFisher mL磁珠提取儀 |
| RE0196D | 96份 | Thermo Scientific KingFisher Flex純化系統 |
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【手動提取步驟】
1. 在離心管加入200μl樣品溶液（咽拭子等）、15μl核酸提取磁珠懸浮液、 600μl裂解吸附液；
2. 置于旋轉混和儀，溫和混勻15min ；
3. 用磁分離架吸附磁珠，棄上清；
4. 加入600μl洗滌液I，振蕩混合，洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
5. 加入600μl洗滌液II洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
6. 加入600μl洗滌液III洗滌磁珠1min，吸附磁珠，棄上清；
7. 再次加入600μl洗滌液III洗滌磁珠1min；
8. 吸附磁珠，棄上清后靜置3-5min，去除乙醇殘留；
9. 加入50μl洗脫液，溫和混勻，洗脫5min；
10. 磁場吸附磁珠，回收含核酸洗脫液至另一RNase-free離心管內，用于后續檢測或-20°C儲存。
【自動化提取步驟（以32通道為例）】
1. RE0196B預裝板設置（96孔深孔板，樣品量200μl，16通量）
2. 從試劑盒中取出預分裝96深孔板，輕甩96深孔板使試劑及磁珠均集中到96深孔板底部。使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免96深孔板振動，防止液體濺出（注意：室溫低
于15°C時，請在開封使用前將96孔板置于37°C預熱20min，以避免沉淀析出）；
3. 在第1列、第7列溶液中加入200μl待提取樣本；
4. 放置2個8道磁套；選擇附表所列的自動化提取程序，開始提??；客戶可按所使用的核酸自動提取儀適當調整程序，如果有問題，請聯系技術支持；
5. 轉移第6列、第12列中含核酸的洗脫液至RNase-free離心管內，用于后續檢測或-20°C儲存。
| 次序 | 列號 | 程序 | 混合時間（sec.） | 磁吸時間（sec.） | 等待時間（sec.） | 體積（μl） | 混合速度 | 溫度（℃） |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 裂解結合 | 900 | 20 | 0 | 800 | 快 | 37 |
| 2 | 2 | 洗滌1 | 120 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 3 | 3 | 洗滌2 | 60 | 20 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 4 | 4 | 洗滌3 | 60 | 30 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
| 5 | 5 | 洗滌4 | 60 | 30 | 120 | 600 | 快 | 室溫 |
| 6 | 6 | 洗脫 | 300 | 60 | 0 | 100 | 快 | 45 |
| 7 | 4 | 移去磁珠 | 30 | 0 | 0 | 600 | 快 | 室溫 |
A. 病毒RNA得率低
1.取樣前樣品沒有充分混勻。病毒樣品取樣前適當將樣品震蕩混勻。
2.磁珠加樣量不足。請在吸取磁珠前將核酸提取磁珠懸液充分混勻。
3.與磁珠結合不充分。在RNA與磁珠結合過程中請溫和搖勻，確保RNA與磁珠充分結合。
4.樣品沒有按照要求保存導致RNA降解。
B. 獲得的RNA條帶彌散，RNA片段斷裂
1. 樣品冷藏時間過久，沒有按照要求冷凍保存。請使用新鮮及正確保藏的樣品。
2. 操作過程過于劇烈，RNA被機械打斷。請嚴格按照說明書操作。
C. RNA樣品不純，抑制或者干擾后續試驗
1.樣本裂解結合后沒有進行磁珠轉移更換離心管，導致管壁黏附的雜質污染最終提取物。
2.磁珠沒有完全干燥，有乙醇殘留。最后一次洗滌后盡量吸凈離心管內的液體。
3. 加入洗脫液之前將磁珠靜置5min左右，確保乙醇完全揮發。
