膠回收試劑盒(DNA Gel Extraction Kit) 用于從瓊脂糖凝膠電泳后割取的含有目的DNA的凝膠塊中快速提取回收DNA。該目的DNA通常為PCR產物、質粒DNA酶切片斷、質粒DNA單酶切后的線性化產物、DNA連接產物等。提取過程簡單快速:使用溶膠液將瓊脂糖凝膠完全融化后,加入磁珠使DNA與磁珠結合,并在室溫下完成洗滌及將DNA從磁珠上洗脫下來,無需離心和乙醇沉淀過程,可實現DNA的快速大規模自動化純化過程。試劑盒適用于純化50bp-20kb DNA。 根據樣品的不同,DNA回收效率通常為60-95%,純化所得DNA可直接用于酶切,連接,轉化,測序,PCR,雜交等后續操作。
操作流程(示意圖):
磁珠法DNA膠回收試劑盒在膠回收的應用實例見下。
目錄號 | 規格 | 適用機型 |
---|---|---|
DF01001 | 100份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、Hamilton等全自動移液工作站 |
DF01002 | 500份 | 瓶裝,適用于手工提取及Tecan、H等全自動移液工作站 |
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【手工操作步驟】
1. 切膠回收后,稱重,加入3倍重量體積比的溶膠液GS(膠為100mg,則加300μl溶膠液GS);
2. 70℃水浴加熱15分鐘至膠完全融化,期間顛倒混勻3-4次,加速凝膠融解。凝膠全部融解后從水浴中取出;待溶液冷卻后,加入25μl磁珠混合均勻;
3. 按300μl溶膠液加入200μl沉淀液的比例加入沉淀液(溶膠液:沉淀液=3:2),顛倒混勻1-2min;
4. 用磁分離架吸附磁珠,棄上清;
5. 加入500μl洗滌液W1洗滌磁珠,吸附磁珠,棄上清;
6. 再次加入500μl洗滌液W1洗滌磁珠,吸附磁珠,棄上清;
7. 加入500μl洗滌液W2洗滌磁珠,吸附磁珠,棄上清后靜置5min,去除乙醇殘留;
8. 加入10-30μl洗脫液,于56℃洗脫5min;
9. 磁場吸附磁珠,回收含目的DNA的洗脫液至另一干凈離心管內,進行DNA檢測及后續實驗。
1. 溶膠液GS對人體是否有刺激性?
答:有,請小心操作并注意適當防護。若不慎濺到皮膚,請用大量水沖洗。
2.溶膠液GS在低溫下儲存是否會有沉底析出?
答:會,如有沉淀,請在使用前先將該溶液置于37℃水浴中待溶液澄清后使用。
3.DNA片段大小是否會影響回收效率?
答:小于100bp或大于10kb的DNA片段回收效率略低一些。此外,若樣品中DNA含量過低也會導致回收效率下降。
4.磁珠結合的DNA量有多少?
答:25μl核酸提取磁珠結合的DNA量可達10μg。